Activité : mettre en œuvre un protocole pour montrer l’effet mutagène dose-dépendant des UV

Protocole :

Étape 1 : mise en place des conditions stériles

CONSIGNES DE SÉCURITÉ

Faire pousser des levures n’est pas un acte dangereux, sinon il y a bien longtemps que nous ne mangerions plus de pain. Cependant, il faut savoir que le milieu utilisé et que les conditions de culture des levures peuvent convenir à d’autres microbes moins « sympathiques ».

Il est donc très important de veiller à ne pas contaminer les boîtes avec les micro-organismes présents dans l’environnement.

1/ Mettre la blouse et attacher les cheveux longs.

2/ Se désinfecter les mains.

3/ Nettoyer la zone de manipulation sur la paillasse (zone de 50 x 50 cm) avec une solution désinfectante.

4/ Créer un champ stérile : placer la plaque chauffante au centre de la paillasse et l’allumer.

ATTENTION : ne pas se brûler. Plus aucun déplacement autorisé dans la salle.

Toutes les manipulations et tous les objets manipulés devront toujours rester dans le champ stérile.

RAPPEL : Toutes les manipulations et tous les objets manipulés devront toujours rester dans le champ stérile.

Étape 2 : préparation des boîtes de culture

1/ Prendre les 4 boîtes de Pétri contenant un milieu nutritif pour les levures.

2/ Sans les ouvrir, indiquer sur le côté des boîtes à l’aide du stylo feutre indélébile :

les initiales de votre groupe ;

la durée prévue d’irradiation (0, 30, 60 ou 120 s).

Étape 3 : préparation de la suspension de levures

1/ Chauffer l’inoculateur au dessus de la plaque chauffante pour le stériliser puis laisser le refroidir.

2/ Prélever avec l’inoculateur, 2 colonies de levures rouges (sans appuyer pour ne pas prélever le milieu de culture).

3/ Déposer les 2 colonies prélevées dans un tube d’eau stérile (en trempant l’anneau de l’inoculateur dans l’eau et en agitant légèrement).

4/ Fermer le tube d’eau contenant les levures et agiter légèrement.

Étape 4 : ensemencement

1/ Ouvrir l’emballage de la pipette stérile à hauteur de la plaque chauffante pour rester en conditions stériles.

2/ À l’aide de la pipette, prélever un peu de suspension de levures.

3/ Prendre une de boîte de culture préparée lors de l’étape 2.

4/ En restant proche de la plaque chauffante, déposer 2 gouttes de suspension de levures au milieu de la boîte de Pétri maintenue entrouverte le moins longtemps possible. Remettre la pipette dans le champ stérile.

5/ Étaler les levures avec un râteau de plastique stérile en maintenant le couvercle entrouvert jusqu’à ce que la surface de la boîte apparaisse sèche.

6/ Répéter les opérations 1 à 5 pour toutes les 3 autres boîtes de cultures.

7/ Éteindre la plaque chauffante.

Étape 5 : irradiation aux UV

1/ Mettre des gants.

2/ La lampe à UV éteinte, déposer la boîte de Pétri nommée « 30 s » dans la boîte à UV.

3/ Enlever le couvercle de la boîte de Pétri.

4/ Referme la boîte à UV et allumer la lampe à UV pendant 30 s.

5/ Éteindre la lampe à UV.

6/ Remettre le couvercle sur la boîte de Pétri.

7/ Répéter les opérations 1 à 6, pour la boîte de Pétri « 60 s » et pour la boîte de Pétri « 120 s », en respectant bien des durées d’irradiations prévues.

Étape 6 : mise en culture en étuve à 28°C pendant 1 semaine.