TP : la respiration cellulaire

Protocole

OBTENTION DE MITOCHONDRIES A PARTIR DE CELLULES VEGETALES

Pour étudier le rôle des mitochondries, il est nécessaire de les isoler.

1. Mixer 60 g de morceaux de navets dans 80 mL de tampon phosphate pH 7.4 (permet de briser les cellules végétales).

2. Filtrer le jus sur deux compresses dans le bécher.

3. Renouveler l'opération 4 fois.

4. Aérer la suspension pendant 5 minutes avec un bulleur si possible.

RÉALISATION DU MONTAGE EXAO

1. Préparer les seringues d’injection des différents réactifs.

2. Placer de l’eau à 40°C dans de l’enceinte autour de la cuve centrale.

3. Introduire la suspension de mitochondries bien oxygénée dans la cuve centrale.

4. Fermer l’enceinte.

5. Lancer l’agitation modérée.

6. Mettre la sonde en place.

RÉALISATION DES MESURES

1. Paramétrer le logiciel et choisir un temps d’acquisition de 5 minutes.

2. Lancer l’acquisition.

3. Au bout de 1 minutes, injecter 1mL de solution de glucose et observer l’évolution de la concentration en O2.

4. Après encore 1 minute, injecter 1 mL de solution de pyruvate et observer l’évolution de la concentration en O2.

INTERPRETATION

Communiquer vos résultats et interpréter afin de répondre au problème.